前言

　　军团菌的监测检验工作一直是昂贵、烦琐、低效的事。

　　为了使其变得简易、轻松、高效，我们需要解决三个问题。

　　军团菌检验的三个问题

　　1.简明有效的检验程序的建立。

　　2.(保证质量和价格合理的)成套军团菌检验产品的稳定供应。

　　3.(高质量、高效率和价格合理的)膜法过滤器的解决。

　　简明高效的外环境水军团菌培养分离程序简介：

　　采样：300ml(空调水);1-5L(饮用水)

　　实际通过滤膜的水量：空调水300毫升;饮用管道水1000毫升。

　　浓缩：用合格的滤器(最好用负压三头滤器)过滤后剪碎滤膜。加入3毫升原水，放振荡器上30秒.

　　酸处理：1毫升上述过滤水+1毫升已标定酸，混匀后作用5分钟.然后从中取0.1毫升接种GVPC琼脂平板(在平板1/3处推干后，在另2/3处划线分离)。

　　培养：将GVPC琼脂平板放置于CO2培养箱或烛缸中''36℃培养4～6天。

　　筛选：挑取可疑(灰蓝色光滑闪亮)菌落，同时点种GVPC琼脂平板和血琼脂平板(每个平板可点种10-20个菌落)。36℃培养2～4天，保留血平板完全不生长而GVPC平板生长良好的菌。

　　初步鉴定：

　　o菌落形态像。

　　o血琼脂完全不生长。

　　oG(-)小杆菌

　　注意：

　　1. 从同一标本中分离多种军团菌：

　　每个平板可挑取3～5个菌落，做玻片军团菌血清分型(约有1/4左右的空调水标本中可能分离出两种血清型以上的军团菌''而为此必须使用能够对各个军团菌型别特别是嗜肺军团菌1-8型单独型别分型的军团菌分型血清.)。

　　2. 定量报告(必须使用本操作程序和我们标定的酸处理液)：

　　使用标定过的酸液作酸处理，可根据军团菌菌落数和简单公式，作出标本中军团菌数的定量报告(每毫升水中军团菌活菌数)。

　　公式1：每毫升水中军团菌活菌数 = 平板上军团菌菌落数÷2.5(当滤膜过滤的标本水量固定为300毫升时''适用于此公式)。

　　公式2：每毫升水中军团菌活菌数 = 平板上军团菌菌落数÷(X÷120) (当滤膜过滤的标本水量不固定时''适用于此公式)。

　　注: X = 公式2中实际经过滤膜的水样毫升数。

　　3. 避开钠离子:

　　钠离子对军团菌的生长有显著的抑制作用.因此在整个检验过程中''必须避免使用含钠离子的试剂如生理盐水(可用蒸馏水代替)。

　　上海科玛嘉微生物有限公司

　　陈长怡